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NT-proBNP自由血漿
產(chǎn)品時間：2025-06-23
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甲狀腺球蛋白抗原
BNP和NT-proBNP自由血漿，EDTA
貓編號# 8BFP
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NT-proBNP自由血漿
貓編號。
8BFP
來源：
混合正常人EDTA血漿。
對獻(xiàn)血者采集的血樣進(jìn)行了檢測，結(jié)果為乙肝表面抗原（HBsAg）、人類免疫缺陷病毒1型（HIV-1）和2型（HIV-2）抗體及丙型肝炎病毒（HCV）陰性。
應(yīng)用：
BNP和NT-proBNP游離血漿不含完整的前BNP分子和任何前BNP片段（BNP和NTproBNP）。它可以用于制備任何前BNP相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品，用于基于檢測任何種類的前BNP相關(guān)肽的免疫分析。
凈化：
免疫親和層析法分離混合的人正常血漿。
用于親和柱的凝膠是通過將具有不同表位特異性的抗BNP和抗NTproBNP單克隆抗體與BrCN活化的Sepharose CL 4B偶聯(lián)制備的。
展示：
冷凍液體。
存儲：
-20 °C（允許 -15 … -30 °C）
材料安全注意事項(xiàng)：
此產(chǎn)品僅售用于研究或進(jìn)一步制造。處理此材料時應(yīng)遵循標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作程序。
以下是為您翻譯的《人proBNP、BNP和NT-proBNP技術(shù)說明》，在翻譯過程中，我嚴(yán)格遵循了醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的專業(yè)術(shù)語規(guī)范，并保留了原文的格式結(jié)構(gòu)：
技術(shù)說明
血液凝固與貧血 • 骨代謝 • 心臟標(biāo)志物 • 生育與妊娠 • 激素標(biāo)志物 • 免疫學(xué)與血清學(xué) • 傳染病 • 炎癥 • 腎臟疾病 • 代謝綜合征 • 神經(jīng)科學(xué) • 甲狀腺疾病 • 腫瘤標(biāo)志物 • 獸醫(yī)學(xué)
人proBNP、BNP和NT-proBNP
腦鈉肽（BNP）及其前體proBNP的N末端部分（NT-proBNP）是已確立的心力衰竭（HF）診斷和預(yù)后生物標(biāo)志物。心力衰竭是一個嚴(yán)峻的臨床和公共衛(wèi)生問題，其患病率和經(jīng)濟(jì)成本持續(xù)上升。根據(jù)美國心臟協(xié)會的數(shù)據(jù)，美國有650萬人患有心力衰竭，每年新增病例近100萬（1）；全球范圍內(nèi)，患病率超過2300萬人。慢性心臟病、高血壓和糖尿病是已知的危險因素，且65歲以上人群的心力衰竭患病率更高。心力衰竭與顯著的發(fā)病率和死亡率相關(guān)。
BNP、NT-proBNP和proBNP作為診斷標(biāo)志物
臨床指南建議在疑似急性心力衰竭患者的初始評估中測量BNP或NT-proBNP，以排除心力衰竭。這兩種標(biāo)志物也可用于監(jiān)測疾病進(jìn)展。BNP和NT-proBNP的臨床價值相似（2-3），目前均在臨床實(shí)踐中應(yīng)用。
在健康成年人中，血漿BNP的上限為35 pg/ml，NT-proBNP的上限為125 pg/ml（4）。然而，這些值取決于年齡和性別，老年人和女性的值更高。
分析物的濃度與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，可升高數(shù)百倍。有報道稱，在心力衰竭的極早期（根據(jù)紐約心臟協(xié)會分類為NYHA I期），無癥狀患者的兩種肽濃度已升高。NYHA II期和III期，尤其是IV期患者，血液中BNP和NT-proBNP濃度顯著升高。因此，人體血液中的肽測量廣泛用于疑似心力衰竭患者的評估和疾病嚴(yán)重程度的判斷。
測定BNP或NT-proBNP濃度也有助于不同心臟疾病患者的風(fēng)險分層。未來會出現(xiàn)并發(fā)癥的患者，其BNP和NT-proBNP濃度顯著高于無并發(fā)癥的患者。在充血性心力衰竭患者中，高BNP或NT-proBNP水平可預(yù)測死亡，且與心血管風(fēng)險相關(guān)。同時，在急性冠脈綜合征患者中，兩種肽的水平升高可預(yù)測死亡率和嚴(yán)重心力衰竭。
除NT-proBNP和BNP外，心力衰竭患者的血液樣本中還存在大量其前體proBNP1-108。僅檢測proBNP的檢測方法可能具有更高的分析特異性。
臨床應(yīng)用
- 識別或排除心力衰竭
- 評估心力衰竭的嚴(yán)重程度
- 預(yù)測疾病發(fā)展
- 監(jiān)測心力衰竭患者的藥物治療
proBNP及其衍生物的生物化學(xué)
編碼BNP的基因在心肌細(xì)胞中因壓力或容量超負(fù)荷引起的心肌牽張而被激活，導(dǎo)致合成一個134個氨基酸殘基（a.a.r.）的細(xì)胞內(nèi)前體肽preproBNP。去除信號肽后，前體肽進(jìn)一步加工，釋放出具有生物活性的BNP（32個氨基酸殘基）和無已知生物活性的NT-proBNP（76個氨基酸殘基）。BNP、NT-proBNP以及未加工的proBNP均分泌到血液中并在人體血液中循環(huán)（見圖1）。BNP從循環(huán)中被有效清除，其半衰期約為20分鐘。NT-proBNP的半衰期更長，為60-120分鐘，這解釋了為什么血液中NT-proBNP的濃度明顯高于BNP。
proBNP加工示意圖
preproBNP翻譯并切割信號肽后形成proBNP，隨后在多個位點(diǎn)發(fā)生O-糖基化，形成T71糖基化狀態(tài)不同的兩部分proBNP：T71未糖基化和該位點(diǎn)糖基化的分子。糖基化會抑制proBNP的后續(xù)加工，只有T71未糖基化的proBNP才能有效加工成BNP和NT-proBNP。未加工的proBNP、NT-proBNP和BNP釋放入血。
proBNP是一種O-糖基化蛋白，已鑒定出7個糖基化位點(diǎn)（5）。所有糖基化位點(diǎn)均位于NT-proBNP部分，而BNP未被糖基化。
我們之前的研究表明，氨基酸T71的糖基化狀態(tài)對proBNP加工成BNP和NT-proBNP至關(guān)重要。T71位于切割位點(diǎn)附近，只有當(dāng)T71未被糖基化時，依賴轉(zhuǎn)化酶的切割才能發(fā)生。因此，循環(huán)中發(fā)現(xiàn)的大部分未加工proBNP在T71上帶有O-聚糖，而NT-proBNP中的同一氨基酸未被糖基化（6）。
免疫測定開發(fā)試劑
在Hytest，我們多年來一直致力于研究proBNP及其衍生物，并在同行評審期刊上發(fā)表了多篇文章（詳情見第10-11頁）。我們提供多種經(jīng)過充分表征的單克隆抗體（MAbs），可用于開發(fā)靈敏可靠的免疫測定方法，適用于臨床樣本中proBNP、NT-proBNP和BNP的檢測。
我們還提供不同的重組抗原，可作為免疫測定中的標(biāo)準(zhǔn)品和校準(zhǔn)品。
BNP檢測開發(fā)
人BNP是一種3.5 kDa的肽，由proBNP切割成NT-proBNP（N端部分）和BNP（C端部分）形成。BNP由proBNP的氨基酸77-108組成，但在BNP分子中，氨基酸通常編號為1-32。BNP的計算等電點(diǎn)為10.95。
BNP是一種具有利鈉、血管舒張和腎素抑制特性的肽激素（7-9），屬于結(jié)構(gòu)相似的肽激素家族，還包括心房利鈉肽（ANP）、C型利鈉肽（CNP）和尿鈉肽。這些肽的特征是由兩個半胱氨酸殘基之間的二硫鍵形成的17個氨基酸的環(huán)結(jié)構(gòu)，不同利鈉肽的環(huán)結(jié)構(gòu)高度同源，17個氨基酸殘基中有11個相同。在人BNP中，二硫鍵位于C10和C26之間（見圖2）。
人BNP示意圖及不同蛋白酶的主要蛋白水解降解位點(diǎn)
DPP IV為二肽基肽酶IV，NEP為中性內(nèi)肽酶（腦啡肽酶），IDE為胰島素降解酶。
BNP是一種不穩(wěn)定分子（10-11）。多項(xiàng)研究表明，心力衰竭患者血漿中的BNP以多種形式存在，N端和C端均被截斷，只有一小部分BNP以完整的BNP1-32分子形式循環(huán)（12）。已報道蛋白酶如二肽基肽酶IV（DPP IV）和中性內(nèi)肽酶（腦啡肽酶，NEP）可降解BNP，分別生成BNP3-32和BNP5-32（13-14）。一些研究表明，胰島素降解酶（IDE）也可將BNP降解為更小的肽（15-16）。BNP蛋白水解降解的已知位點(diǎn)總結(jié)于圖2。
人血液中的BNP免疫反應(yīng)形式
由于proBNP切割成NT-proBNP和BNP的過程不全，且取決于蛋白質(zhì)的翻譯后糖基化，因此BNP和proBNP均釋放入循環(huán)。除非表位被蛋白酶截斷破壞，否則這些形式均可被BNP分子特異性抗體識別。我們使用凝膠過濾分析心力衰竭患者的血漿樣本，并通過高度敏感的抗體對50E1-24C5測量各組分的BNP免疫反應(yīng)性，該抗體對能夠以相同的特異性檢測不同的BNP形式。凝膠過濾研究結(jié)果顯示，BNP檢測在所有樣本中均檢測到兩個具有BNP免疫反應(yīng)性的峰。第一個峰代表proBNP形式，第二個較小的峰代表BNP形式（見圖3）。我們之前的研究表明，人體血液中主要的BNP免疫反應(yīng)形式是未加工的proBNP（17）。
常規(guī)BNP夾心免疫測定
我們提供多種對BNP分子不同表位具有特異性的單克隆抗體（見圖4）。多種不同的單克隆抗體組合可用于開發(fā)高度特異性、靈敏且快速的常規(guī)型夾心免疫測定，適用于人血液中BNP和proBNP的定量測量。表1顯示了常規(guī)夾心免疫測定的推薦抗體對組合。
所有推薦的捕獲-檢測對均以相同效率檢測BNP肽和未加工的proBNP蛋白（見圖5）。但需要注意的是，市售BNP檢測對proBNP的交叉反應(yīng)性各不相同（18-20）。所有推薦的組合均已用心力衰竭患者的血漿樣本進(jìn)行測試。由于抗體在不同檢測平臺上的性能可能不同，我們建議在開發(fā)免疫測定時至少嘗試四到五種雙位點(diǎn)單克隆抗體組合，以確保選擇在給定檢測條件和平臺上表現(xiàn)佳的組合。
作為BNP免疫測定的標(biāo)準(zhǔn)品，我們建議使用重組糖基化proBNP（貨號8GBP3，見第8頁），因?yàn)檠褐械?span>BNP免疫反應(yīng)性主要由糖基化proBNP代表。
NT-proBNP檢測開發(fā)
NT-proBNP是proBNP的N端部分，由76個氨基酸和7個O-糖基化位點(diǎn)組成，尚未發(fā)現(xiàn)NT-proBNP具有生物活性。其半衰期是BNP的3-6倍，這意味著它在臨床樣本中是一種更穩(wěn)定的標(biāo)志物。NT-proBNP的臨床價值與BNP相似，計算等電點(diǎn)為8.45，分子量為8.5 kDa，但由于糖基化，其表觀分子量更高（17）。
糖基化對NT-proBNP檢測的影響
我們的研究表明，NT-proBNP的糖基化會對某些抗體的識別產(chǎn)生負(fù)面影響。由于O-糖基化，NT-proBNP分子的中央部分（氨基酸殘基28-56）難以被抗體接近，而區(qū)域13-27和61-76則易于識別。
為了闡明糖基化如何影響NT-proBNP的測量，我們使用兩種檢測方法分析了8名心力衰竭患者去糖基化前后的血漿：一種使用對無糖基化位點(diǎn)區(qū)域具有特異性的抗體（15C4-13G12），另一種使用其中一個抗體對糖基化位點(diǎn)區(qū)域具有特異性的抗體（11D1-13G12）。圖7顯示，去糖基化對后一種檢測有顯著影響。
proBNP檢測開發(fā)
我們和其他人的研究表明，除NT-proBNP和BNP外，心力衰竭患者的血液樣本中還存在大量其前體proBNP1-108（17,25-26）。proBNP的計算等電點(diǎn)為10.12，分子量為11.9 kDa，但由于O-連接糖基化，其表觀分子量更高（26）。
現(xiàn)有大多數(shù)市售BNP和NT-proBNP檢測均不同程度地與proBNP發(fā)生交叉反應(yīng)，這種交叉反應(yīng)可能會使BNP和NT-proBNP的相關(guān)性更接近proBNP。
血液中proBNP的水平已被證明與BNP和NT-proBNP高度相關(guān)，并可用于識別在長期隨訪中具有心血管死亡高風(fēng)險的心力衰竭患者（27）。另一項(xiàng)研究表明，循環(huán)proBNP水平與心血管不良事件風(fēng)險增加相關(guān)，且獨(dú)立于BNP（28）。
與市售的BNP和NT-proBNP檢測相比，僅檢測proBNP1-108的檢測可能具有更高的分析特異性。
重組蛋白
重組糖基化人proBNP**：我們提供在哺乳動物細(xì)胞系中表達(dá)的重組proBNP（貨號8GBP3），該蛋白被糖基化，在SDS-PAGE中遷移為表觀分子量在20-25 kDa之間的彌散條帶（見圖15）。我們建議使用糖基化proBNP作為BNP和proBNP免疫測定的標(biāo)準(zhǔn)品。
在大腸桿菌中表達(dá)的人重組（非糖基化）proBNP**：人重組proBNP（貨號8PRO9；氨基酸殘基1-108）在大腸桿菌中表達(dá)，除N端額外有一個Met殘基外，該多肽序列與內(nèi)源性蛋白相同。該抗原可被BNP特異性單克隆抗體（貨號4BNP2）以及所有NT-proBNP特異性單克隆抗體（貨號4NT1）識別。根據(jù)Tricine-SDS-PAGE和HPLC研究，proBNP高度純化，純度超過95%。該抗原可作為BNP、NT-proBNP和proBNP免疫測定中的校準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)品。
重組非糖基化NT-proBNP**：人重組NT-proBNP（貨號8NT2；氨基酸殘基1-76）在大腸桿菌中表達(dá)，除N端額外有一個Met殘基外，該多肽序列與內(nèi)源性NT-proBNP相同。該抗原可被對NT-proBNP不同部分具有特異性的單克隆抗體（貨號4NT1）識別。根據(jù)Tricine-SDS-PAGE和HPLC研究，NT-proBNP的純度超過95%，該抗原可作為NT-proBNP檢測中的校準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)品。
抗原
產(chǎn)品名稱 貨號 純度 來源
NT-proBNP, 重組 8NT2 >95% 重組
ProBNP, 重組 8PRO9 >95% 重組
ProBNP, 糖基化, 重組 8GBP3 >95% 重組
耗竭血漿
貨號 來源
BNP和NT-proBNP游離血漿8BFP 混合正常人血漿
請注意，本技術(shù)說明中顯示的結(jié)果是使用體內(nèi)產(chǎn)生的單克隆抗體獲得的，細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)生的單克隆抗體預(yù)計具有與體內(nèi)產(chǎn)生的單克隆抗體相似的性能。
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