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alpco試劑常見問題與解答
產品時間：2023-02-15
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alpco常見問題與解答
問：我購買的試劑盒可以使用什么樣的樣品類型？
A.每種類型的試劑盒都經過了方案中所示樣品類型的驗證。所有其他樣本類型都必須經過內部驗證。請聯(lián)系ALPCO的產品支持團隊，了解產品用戶可能進行的其他樣本類型測試的更多信息。
問：該試劑盒是否與其他物種交叉反應？
A.每種試劑盒均已針對方案中所示的物種進行了驗證。盡管可能存在交叉反應性，但需要在內部對其他物種進行驗證。請聯(lián)系ALPCO的產品支持團隊，了解產品用戶可能進行的物種驗證的更多信息。
問：我運行了多少標準和控制？
A.每個試劑盒至少包括一套標準品（或一小瓶待稀釋的標準品），在大多數(shù)情況下包括一個或兩個對照品。每次進行分析時，必須運行標準品和對照品（如果包括），強烈建議運行所有標準品/對照品/和樣品一式兩份。
問：我可以使用其他試劑盒或批次的試劑嗎？
答：沒有。不要用其他套件或批次的部件替代。
問：我可以修改培養(yǎng)時間或溫度嗎？
答：沒有。請不要偏離協(xié)議。
問：我可以使用過期的工具包嗎？
答：沒有。如果試劑盒超過了試劑盒標簽上規(guī)定的有效期，則不應使用該試劑盒。
問：我可以使用放置在室溫下的試劑盒嗎？
A.請確保試劑盒及其組件按照試劑盒插頁中的指示存放。有關試劑盒在室溫下穩(wěn)定性的更多信息，請聯(lián)系ALPCO的產品支持團隊。
問：我可以跳過在化驗中運行對照嗎？
答：否。如果提供了對照品，請務必在每次分析中運行對照品。對照品的濃度應在分析證書規(guī)定的范圍內。
問：我可以用多通道移液管清洗盤子嗎？
答：我們不建議使用多通道移液管。必須用足夠且相等的力分配沖洗緩沖液，以正確沖洗井。我們建議使用Statmatic清洗噴嘴tricontinent或自動洗板機。請參閱網站“資源"部分的“學習中心"選項卡，獲取顯示正確洗滌技術的視頻，或單擊此處。
問：有必要對我的樣品進行布局嗎？
答：非常重要的是，要知道你的標準品、對照品和樣品在板上的位置，以便正確生成結果。單擊此處獲取可下載的圖版。這也有助于在潷析過程中，在板條松動的情況下，在板上標記板條（在兩端使用小標簽）。
問：為什么洗滌步驟如此重要？
A.正確清洗平板是運行任何成功ELISA的一個非常關鍵和重要的方面。洗盤子時要保持一致。過快或過慢地清洗平板、不全清洗或抽吸以及讓孔保持干燥都是影響測定精度的因素。我們不建議為此目的使用多通道移液管。多通道移液管沒有施加足夠的壓力來底去除未結合的材料，這將導致更高的背景噪聲。網站的學習中心部分提供了顯示正確洗滌技術的視頻，或單擊此處。
問：我可以冷凍和解凍我的樣品多少次？
A.建議的冷凍/解凍周期因套件而異。我們建議避免重復冷凍和解凍循環(huán)，除非手冊中另有說明。如果采集的樣本量允許，準備并冷凍等分試樣，以消除或減少冷凍/解凍循環(huán)。
問：我可以使用自己的“自制"緩沖器嗎？
A.每個試劑盒都含有稀釋劑和緩沖液，其配方與特定的樣品類型緊密匹配。如果使用未隨試劑盒提供的組件進行檢測，制造商將不保證試劑盒的性能。
問：如果稀釋劑用完了怎么辦？
A.提供足夠的試劑，以在遵循方案時運行整個試劑盒。如果您的研究類型需要更高的稀釋度，請在設置分析之前計算所需的稀釋劑量，并且可以購買額外的稀釋劑。請聯(lián)系客戶支持以獲取有關單個組件可用性的信息。
問：我的控制裝置超出范圍。我的數(shù)據(jù)是否無效？
A.對照品的濃度必須在分析證書規(guī)定的范圍內。如果對照超出范圍，化驗可能無效。此外，確保已使用協(xié)議中建議的曲線擬合。如果提供了多個建議，則使用適合標準數(shù)據(jù)點的回歸方法。
問：我的標準曲線沒有得到很好的值。我可以使用協(xié)議中的示例值嗎？
答：沒有。切勿使用示例值來計算化驗結果。應根據(jù)每次測定獲得的標準值/校準值生成樣品濃度。
問：我的樣本產生的OD值超出標準范圍。我還能計算濃度嗎？
A.只能使用標準曲線范圍內的樣本值。超出此范圍的值通常不是線性的，可能導致錯誤的推斷結果。
問：我的標準曲線很好，但我的樣本沒有得到信號。為什么？
A.樣品可能含有分析物，但基于試劑盒的靈敏度，無法檢測。樣本的矩陣也可以掩蓋檢測。確保按照方案中的規(guī)定進行稀釋，并審查程序，以確保所有試劑的添加量和順序正確。
問：我可以運行多少個樣本？
A.ALPCO現(xiàn)在提供了一個工具來幫助計算一個套件中可以運行的樣本數(shù)量。一旦您審查了協(xié)議以確定您計劃運行的特定試劑盒可能需要的標準品、控件和空白品的數(shù)量，請單擊此處進入樣本計算器。
Q.什么是參考波長？
A.參考波長是用于校正（標準化）主波長OD值的次級波長。這有助于解釋鋼板中的缺陷。
問：為什么450nm是常用的測量波長？
A.測量波長由每個試劑盒中使用的基質確定。最常見的是TMB。它產生一種在650nm波長下可測量的藍色。它可以通過停止與1M磷酸或1M硫酸的反應而用于終點測定。酸化時形成黃色反應產物，其在450nm下可測量。
Q.測量波長和參考波長之間的區(qū)別是什么？
A.測量波長和參考波長之間的主要區(qū)別在于，第一個波長用于讀取基板產生的吸光度，第二個波長（參考波長）用于檢測板中的缺陷。
問：我可以在沒有參考波長的情況下讀取該板嗎？
答：是的，你可以。然而，使用參考波長可以提高測定的靈敏度。
ELISA故障排除指南
查看完整的ELISA故障排除指南
鋼板清洗不足
對于自動清洗機：檢查噴嘴是否堵塞，驗證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關更多維護信息，請參閱用戶手冊。
對于手動沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機，特別是在進行化學發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術的視頻。
不要跳過清洗或浸泡步驟。
添加綴合物或基質期間多通道移液管出現(xiàn)問題
檢查多通道移液管校準。確保所有端固定牢固，每次更換端時，吸取相同體積的液體。觀察氣泡并考慮反向吸移技術，以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。
移液技術
檢查單吸管校準。觀察氣泡并考慮反向吸移技術，以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。
井內氣泡
確保在每個清洗步驟后用力敲打板，使其干燥，以盡量減少孔中殘留的清洗緩沖液。加入分析試劑（尤其是基質）后殘留在孔中的氣泡應在平板培養(yǎng)和平板讀數(shù)之前去除。可以使用干凈的移液管端來去除氣泡。
僅樣本的重復之間精度差（高CV值）
樣品混合不足
在移液之前對每個樣品進行渦流，以確保樣品均勻。
移液技術
在將第一個樣本復制品轉移到平板之前，將樣本從端吸入和取出兩次，以覆蓋端內部。在轉移樣品時，確保沒有樣品液滴粘附在端的外部。如果容量允許，考慮采用反向吸移技術，以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。
鋼板清洗不足
對于自動清洗機：檢查噴嘴是否堵塞，驗證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關更多維護信息，請參閱用戶手冊。
對于手動沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機，特別是在進行化學發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術的視頻。
不要跳過清洗或浸泡步驟。
高樣本和低樣本的結轉
確保每個樣本之間的端都發(fā)生了變化。每次孵育時使用新的平板密封劑。
樣品稀釋緩沖液錯誤
如果樣品需要稀釋，確認使用了適當?shù)南♂尵彌_液。
標準曲線不佳（與之前的結果或分析證書不匹配）
鋼板清洗不足
對于自動清洗機：檢查噴嘴是否堵塞，驗證分配量，并定期清潔以防止和清除任何堆積物。有關更多維護信息，請參閱用戶手冊。
對于手動沖洗：確保所有井都用沖洗緩沖液強制過滿。避免使用多通道移液管進行清洗。考慮從清洗瓶切換到手持式歧管或自動洗板機，特別是在進行化學發(fā)光分析時。這里提供了顯示正確洗滌技術的視頻。
不要跳過清洗或浸泡步驟。
移液技術
檢查移液管校準。觀察氣泡并考慮反向吸移技術，以確保氣泡不會干擾吸移精度。參見正向和反向移液視頻。
試劑混合不充分
使用前，讓重組試劑放置在手冊中所示的時間長度內。使用適當?shù)脑O備（渦流混合器等）確保試劑在使用前是均勻的。如果混合試劑盒試劑以形成“工作"成分，則確認使用了正確的體積和稀釋劑。
板材晃動不足
不正確的搖動運動會導致混合不足和抗體/分析物相互作用。按照使用說明中建議的速度搖動板。建議使用半徑很小的軌道運動振動器。參見示例。
添加到井中的試劑量錯誤
檢查剩余體積，以確認向孔中添加了正確體積的試劑。
制備試劑的儲存
確保所有試劑正確儲存并在規(guī)定期限內使用。對于化學發(fā)光測定，預先制備魯米諾底物可導致信號降低。
環(huán)境溫度低或不一致
遵循方案中所示的培養(yǎng)溫度。
化學發(fā)光儀器的差異
信號，或相對光單位（RLU），可以在不同的化學發(fā)光板讀數(shù)器之間顯著變化。“典型"標準曲線或分析證書中顯示的信號可能與觀察到的信號非常不同。
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