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    北京華新康信對Brainbitsllc常見問題進(jìn)行解答

    發(fā)布時間: 2021-06-18  點(diǎn)擊次數(shù): 1157次

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    Brainbitsllc常見問題:

     

    媒體

    1. 混合 B27 補(bǔ)充劑 / Neurobasal 培養(yǎng)基 / 0.5 mM 谷氨酰胺后,培養(yǎng)基能穩(wěn)定多久?

     

    我們在 4 o C 的黑暗中儲存長達(dá) 6 個月。

     

    2. 我需要多久補(bǔ)充一次 Neurobasal/B27/谷氨酰胺?

     

    我們每 3 4 天更換 1/2 培養(yǎng)基,但這部分取決于細(xì)胞密度。參見 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果細(xì)胞密度高于 500/mm 2  ,則每 2 天更換 1/2

     

    3. 我可以用一些 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺(無谷氨酸鹽)來稀釋 BrainBits 附帶的 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺 + 谷氨酸鹽,比如 1:2 稀釋,細(xì)胞仍然生長嗎?

     

    是的,但也不是。請參閱上面引用的 FOCUS 文章。

     

    4. 您通常在培養(yǎng)第 4 天之前向 Neurobasal/B27 添加 25 uM 谷氨酸鹽。谷氨酸的目的是什么?

     

    它幫助海馬神經(jīng)元發(fā)芽并促進(jìn)活力。

     

    5. 不加谷氨酸有問題嗎?

     

    4 DIV 時,您的存活率將降低約 30%

     

    6. 我需要一些培養(yǎng)基或試劑來維持培養(yǎng)物嗎?

     

    您將需要您選擇的鍍膜玻璃或塑料基板。該訂單包括足夠的培養(yǎng)基來開始培養(yǎng)并維持 4 5 天。除此之外,您將需要更多培養(yǎng)基,我們可提供完整的即用型 NbActv1 配方,也可通過 Invitrogen 單獨(dú)購買。

     

    7. 我應(yīng)該用抗生素/抗真菌劑補(bǔ)充 B27/Neurobasal 培養(yǎng)基嗎?例如:pen/strep/fungizone 或慶大霉素?

     

    我們通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌劑的情況下進(jìn)行培養(yǎng),并取得了良好的效果。這具有三個優(yōu)點(diǎn):

     

    首先,當(dāng)出現(xiàn)污染時,更容易確定污染源。其次,如果您使用抗生素,當(dāng)您感染時,就更難擺脫。第三,抗生素已被證明可以激活神經(jīng)元中的癲癇樣爆發(fā)活動。然而,我們有時會在慶大霉素 (10 ug/ml) 中開始培養(yǎng),并在細(xì)胞粘附后一小時后將其沖洗干凈。

     

    休眠®

    *HibernateNeurobasal B27 僅用于研究目的,由 Invitrogen Corporation 制造。HibernateNeurobasal B27 Invitrogen Corporation 的商標(biāo)。

     

    1. 我可以使用 Hibernate 進(jìn)行木瓜蛋白酶治療嗎?

     

    BrainBits LLC 提供 5 ml 不含 B27 Hibernate-Ca,用于在 15 ml 無菌離心管中最佳分離 BrainBits 與木瓜蛋白酶。加入木瓜蛋白酶 (Worthington) 后,在 37 o C 下溶解10 分鐘。您需要使用 0.2 µm 過濾器對溶液進(jìn)行消毒。

     

    2. 你是否總是在 Hibernate 中添加 B27 谷氨酰胺,或者它是否仍然在 Hibernate 中保持細(xì)胞存活?

     

    幾乎總是。請參見 Brewer and Price (1996) PM:8856709 的圖 1 37 0 C 環(huán)境 CO2 中,Neurobasal/B27/gln 中的 LD50 24 小時,休眠/B27/gln 中為 >3 天。

     

    3. 我們可以提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate 嗎?

     

    是的,事實(shí)上我們有幾個客戶提出了這個要求。因此,我們可以以相同的價格提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate A。您只需要告訴我們您是希望用 NaCl 將滲透壓調(diào)整到正常水平還是低于平常水平,以便您可以自行調(diào)整。

     

    4.  Hibernate 的其他用途包括:

     

    轉(zhuǎn)基因小鼠基因分型過程中的大腦儲存

     

    將腦組織運(yùn)送給合作者

    基質(zhì)

    1. 我不經(jīng)常使用聚-D-賴氨酸。我制作了 5 毫克/毫升的 (100x) 儲備溶液并將其等分到小冷凍管中。我可以將原液冷凍保存多久,并且仍然可以與海馬細(xì)胞一起使用?

     

    大概是永遠(yuǎn)。不要儲存在聚丙烯管中。聚苯乙烯或 PET 更好。解凍時一定要攪拌均勻。

     

    2. 一些研究人員使用聚乙烯亞胺代替聚賴氨酸。一個比另一個有優(yōu)勢嗎?

     

    PEI 比聚賴氨酸便宜。我們使用 PEI 并沒有取得多大成功,但 Mark Mattson 在開始在 Neurobasal/10% 血清中培養(yǎng)后一直使用它。報告表明神經(jīng)元存活率或尖峰率沒有顯著差異。

     

    Soussou WVYoon GJBrinton RDBerger TW (2007) 在表面處理的多電極陣列上培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò)形態(tài)和電生理學(xué)。IEEE 跨生物醫(yī)學(xué)工程 541309-1320。 電話:17605362

     

    Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海馬神經(jīng)元在低密度限定培養(yǎng)基中的存活和生長:夾心培養(yǎng)技術(shù)或低氧的優(yōu)勢。大腦研究 494:65-74。電話:2765923

     

    3.  BrainBits 神經(jīng)元越來越多地生長為細(xì)胞簇或團(tuán)塊,而不是孤立的。怎么了?

     

    這意味著細(xì)胞與自身的粘附比與基底更緊密。最可能的問題是基材準(zhǔn)備不充分。將您的方案與推薦的聚賴氨酸制備和基材涂層進(jìn)行比較。

     

    4. 關(guān)于聚-L-賴氨酸與聚-D-賴氨酸,我假設(shè)使用聚-D-賴氨酸,因?yàn)槿绻纸獬少嚢彼幔?xì)胞就不能使用d賴氨酸。有什么道理嗎?

     

    這就是理論。在一些早期研究 (Brain Res. 494:65(1989)) 中,我們發(fā)現(xiàn)差別不大。

     

     

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